公衛執業醫師考點：多肽鏈的分離

細胞核中DNA的某一區段轉錄出來的mRNA從核孔穿出來進入細胞質中，與核糖體結合起來。蛋白質合成就在核糖體進行。蛋白質開始合成時，首先核糖體與mRNA結合在一起，核糖體附著在mRNA的一端(起動部位)，然後沿著mRNA從5′3′方向移動(當核糖體向前移動不久，另一個核糖體又結合上去，所以一個mRNA可以有多個核糖體連續上去)。

在測定一個蛋白質的結構以前，首先必須保證被測蛋白質的純度，使結果準確可靠。其次要了解它的分子量和亞基數，按照其亞基數將蛋白質分成幾個多肽鏈。

蛋白質分子多肽鏈的連線有共價結合和非共價結合兩種。要拆開以共價結合的-S-S-連線的多肽鏈，必須採用的化學處理方法常有：

　　①過甲酸氧化

用氧化劑過甲酸斷裂-S-S-.這個反應一般在0℃下進行2小時左右，兩個S就全部能轉變成磺酸基，這樣被氧化的半胱氨酸稱為磺基丙氨酸。

如果蛋白質分子中同時存在半胱胺酸，那麼也會被氧化成磺基丙氨酸。此外甲硫氨酸和色氨酸也可被氧化，從而增加分析的複雜性。

　　②巰基乙醇還原

利用還原劑巰基乙醇亦可使蛋白質的-S-S-斷裂。當高濃度的巰基乙醇在pH8?條件下室溫保溫幾小時後，可以使-S-S-定量還原為桽H.與此同時反應系統中還需要有8摩爾脲或6摩爾鹽酸胍使蛋白質變性，多肽鏈鬆散成為無規則的'構型，此時還原劑就可作用於-S-S-.此反應是可逆的，因此要使反應完全，疏基乙醇的濃度必需在0.1-0.5摩爾。

　　③Cleland試劑的還原作用

Cleland′s指出二硫赤蘇糖醇(dithioerythriotol)及二硫蘇糖醇(dithiothriotol)在氧化還原能力上是比較強的試劑，只要0.01摩爾就能使蛋白質的-S-S-還原，反應基本與疏基乙醇相似，且在許多球蛋白反應中，可以不用變性劑。

Cleland試劑首先與蛋白質-S-S-形成中間物，反應終了，還原劑被氧化形成一個穩定的六環化合物，蛋白質則被還原。

還原蛋白不穩定，SH基極易氧化重新生成-S-S-鍵。穩定SH基的方法有：

(A)烷基化試劑使SH基轉變為穩定的硫醚衍生物。

如果碘代乙醯胺代替碘代乙酸，其產物S?羧氨甲基衍生物不帶電荷，磺代乙酸也可與組氨酸、蛋氨酸和賴氨酸發生反應，但反應條件不同，可通過各種pH及反應時間進行控制。

(B)氨乙基化

蛋白質分子的幾條肽鏈若以非共價健結合，則用尿素、鹽酸胍等變性劑即可拆開。蛋白質的多肽鏈被拆開後，將它分離純化，一般多用凝膠過濾、離子交換、電泳等方法，茲不贅述。

分離純化後的每條肽鏈還要進一步分析其末端。