除菌過濾器微生物截留的試驗分析
【摘要】
目的：探討非最終滅菌注射劑生產過程中除菌過濾器對微生物的截留效果，確認過濾除菌工藝的有效性與安全性。方法：採用孔徑為0.22μm除菌級聚醚碸濾芯，以直徑在0.3～0.4μm的缺陷假單胞菌為生物指示劑，將菌液用濾芯過濾，計算被過濾液體過濾前的微生物數量與過濾後的微生物數量比的常用對數值(LRV)。結果：菌液過濾前後微生物數量比的常用對數值LRV大於7。結論：濾芯每平方釐米有效過濾面積符合中國藥典2005年版2部附錄ⅩⅦ滅菌法的規定，確認除菌過濾工藝在注射劑生產過程中的有效性與安全性。
【關鍵詞】
除菌過濾器；缺陷假單胞菌；微生物截留；無菌保證程度除菌過濾器在藥品生產中主要用於無菌藥品的除菌過濾，除菌過濾是藥品生產過程中非常重要的一種除菌方式，特別是對非最終滅菌的注射劑而言，除菌過濾是消除藥液中微生物的`唯一方法。通過對除菌過濾器濾芯材質的選擇、滅菌方法、完整性測試以及細菌的截留試驗，確認除菌的效果，提高除菌過濾在注射劑生產過程中無菌保證程度重要性的認識。
1材料與方法
1.1試驗材料
(1)濾芯：濾膜材質為聚醚碸，10英寸226卡式，孔徑：0.22μm，級別：除菌級，濾膜面積：3600cm2。來源：頗爾過濾器(北京)有限公司。(2)全自動過濾器完整性測試儀：上海先維過濾裝置廠，型號：212A。(3)甘露醇：廣西南寧化學制藥有限公司，批號：0809110，配置20kg濃度為0.5%的水溶液。
(4)微生物指示劑：缺陷假單孢菌(ATCC19146直徑0.3～0.4μm)，北京鑫四環消毒技術開發中心。(5)菌液濃度：每平方釐米應達到107個菌的挑戰水平。(6)培養基：硫乙醇酸鹽流體培養基：北京三藥科技開發公司，批號:081111；營養
瓊脂：廣東環凱微生物科技有限公司，批號:200902081；營養肉湯：廣東環凱微生物科技有限公司，批號:200901071。(7)試驗壓力：約為0.2Mpa。(8)試驗流量：筒式過濾器2～3.86L/(m3·min)。
1.2方法
1.2.1濾芯的清洗
將濾芯浸泡於0.1%氫氧化鈉溶液中12～24h，取出用注射用水反覆沖洗至沖洗水的pH值呈中性。
1.2.2完整性測試
將過濾器與完整性測試儀連線，向經過注射用水充分浸潤的過濾器(含濾芯)中通入壓縮空氣，觀察壓力錶讀數的變化，當浸入液麵下的導管出口處出現第1個氣泡時，讀取壓力錶指示值，此壓力值即為濾器濾芯的起泡點壓力，壓力要求≥0.31Mpa。
1.2.3缺陷假單胞菌液的製備
取缺陷假單胞菌的新鮮培養物少許，接種至營養肉湯培養基中，於(32.5±2.5)℃培養18～24h，活菌計數將上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液製成含菌<100CFU/mL的菌液，稀釋級別：107，計數結果：27CFU/mL。
1.2.4微生物截留試驗
(1)過濾系統滅菌：將試驗所需的不鏽鋼桶、矽膠管、過濾器及濾芯等置於脈動真空滅菌器中於121℃滅菌30min。(2)對照試驗：取1000mL甘露醇溶液(0.5%)用無菌過濾器壓濾，各取2份樣品，分別用薄膜過濾法處理後，一份作陰性對照，另一份在最後1次沖洗液中加入缺陷假單胞菌菌液1mL(<100CFU/mL),取濾膜置於硫乙醇酸鹽流體培養基中培養作為陽性對照，對照試驗培養(33℃,14d)均符合規定。(3)截留試驗：將缺陷假單胞菌液360mL加入餘量0.5%甘露醇溶液中攪拌均勻，取1mL按中國藥典2005年版2部附錄ⅪJ微生
物限度檢查法進行檢查，計數過濾前液體的微生物數量。然後將菌液全部用過濾器濾過，取1000mL按過濾前藥液微生物數量檢查法同法操作，計數過濾後的液體的微生物數量。計算被過濾液體過濾前的微生物數量(N0)與過濾後的微生物數量(N)比的常用對數值,即：LRV=1gN01gN=7.8。(4)過濾後濾器的完整性測試將過濾之後的除菌濾器再次進行起泡點測試，確認試驗過程中濾膜的完整性。
2結果
藥液過濾前的微生物的數量與藥液過濾後的微生物數量比的常用對數值為7.8，大於標準規定值7，結果見表1。證明除菌級濾芯可達到每平方釐米107個菌的截留效果，完全符合非最終滅菌注射劑的生產工藝要求。表1微生物截留試驗結果（略）
3討論
除菌過濾器微生物截留試驗結果表明，孔徑為0.22μm除菌級濾芯對微生物的截留試驗可達到LRV大於7的微生物截留效果，達到除菌的目的。但是與其他滅菌方法相比，除菌過濾的風險最大，實際生產中宜安裝第2只已滅菌的除菌過濾器再過濾1次藥液，最終的除菌過濾器應儘可能接近灌裝點。因此，對於採用除菌過濾和無菌生產工藝生產的注射劑產品，在除菌過濾時，被過濾產品總的微生物汙染量應控制在規定的限度內。要達到這一目的，應在無菌控制的環境下進行過濾操作，相關的裝置、包裝容器、膠塞及其他物品應採用適當的方法進行滅菌，並防止再次汙染。對生產用原輔料還應進行微生物限度的檢查，以降低其微生物負載率，通過整個生產過程的嚴格控制，採用經驗證確認的除菌過濾和無菌生產的工藝，產品的無菌是能夠得到保證的。
作者：劉春燕，吳清剛，黎李，陳豔
【參考文獻】
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